Général

La réaction en chaîne de la polymérase (PCR)


Séquence de la PCR

La réaction en chaîne par polymérase (PCR) est un processus artificiel d'amplification de l'ADN.
Il trouve une application pratique dans les tests de paternité, les empreintes génétiques pour les délits criminels ou pour la détection de maladies (maladies génétiques ainsi que les infections virales)
Dans un thermocycleur, l'ADN à amplifier est réuni avec des nucléotides libres, des ADN polymérases et des amorces spéciales. Le thermocycleur permet alors une séquence automatique de la PCR, car il faut plusieurs cycles jusqu'à ce que suffisamment d'ADN ait été amplifié. Un seul brin d'ADN suffit déjà pour appliquer la procédure. Le nombre de duplex d'ADN augmente ensuite de façon exponentielle par cycle (1-2-4-8-16, etc.), de sorte que suffisamment de matériel génétique est disponible après 30-50 cycles. Cependant, dans la réaction en chaîne par polymérase, aucun duplex d'ADN complet n'est amplifié mais seulement des sections prédéterminées. Ces sections peuvent être définies très précisément par des amorces synthétisées artificiellement.
dénaturation: L'ADN est chauffé à environ 90 ° C, ce qui dissout les liaisons hydrogène entre les bases complémentaires. Cela sépare l'ADN en ses brins simples.
hybridationA environ 60 ° C, les amorces spécifiques s'hybrident aux extrémités 3 'des simples brins d'ADN. Le principe de complémentarité s'applique: selon leurs bases, les amorces ne peuvent s'attacher qu'à un homologue complémentaire (adénine avec thymine et cytosine avec guanine).
polymérisation: La température est portée à environ 70 ° C. Les ADN polymérases commencent aux amorces de 3 'à 5' avec la fixation de bases complémentaires (allongement). Au final, deux brins simples d'ADN, deux brins doubles d'ADN, ont été créés.
Maintenant, comme déjà mentionné, il y a une répétition de ces trois étapes.